旋光光譜常常被用來做手性化合物的定性或定量分析，它的作用在多肽或含氨基酸的化合物分析中尤為主要。最近我們遇到一個含有單一氨基酸的樣品，它的測試鑒定標準之一就是它的比旋光度。然而，圍繞著它的比旋光度，我們的測定結果與客戶得到的數據有較大的差異，因而對該化合物的質量產生了歧見。對此我們做了一個較為全面的調研，發現主要的差異竟是來自常用的高標準的化學試劑。

按照文獻我們對于這個化合物的比旋光度測定采用氯仿溶劑制備樣品，很自然地我們用了分析純 (AR)級別。然而當我們的數據與客戶的數據顯示了很大的差異時，我們使用了更高級別的色譜（HPLC）級試劑重新配樣測定，結果發現該化合物的比旋光度比原先的數據增大了很多。考慮到氯仿可能被光照氧化產生氯化氫（HCl）,進而對化合物有影響，我們測了氯仿試劑的pH值，沒有發現問題。最終，我們查了氯仿的COA發現，AR級的氯仿試劑中含有一定含量的乙醇（國產標準0.3%-1%)，用來保證氯仿的穩定性，而在國產HPLC級別的氯仿試劑中乙醇的含量沒有標明，因此我們認為是0%。一般的想法會認為這么一點乙醇含量不會對比旋光度的測定有很大的影響，然而，我們的實驗結果卻展示了一個同樣的化合物在AR溶劑和HPLC溶劑中取得的比旋光度有6%以上的誤差。為此，我們往AR級的氯仿試劑中添加了不同含量的乙醇，然后對該化合物做了一系列比旋光度測試，發現乙醇在氯仿中的含量對該化合物的比旋光度有很大的影響，見圖1。

一個同樣的化合物在AR溶劑和HPLC溶劑中分別取得116.64 和124.36的比旋光度。這表明了在HPLC級氯仿試劑中，基本上確定了其中乙醇含量是或者接近于0%，我們所使用的AR級試劑中含有約0.75%的乙醇。不同的公司可能會按照自己的標準操作規程采用特定級別的試劑來配置測試樣品，這在企業之間研討時，一定要澄清核實。

表1 比旋光度與溶劑中乙醇占比關系趨勢

（不包含AR級試劑氯仿中本身的乙醇含量）

在這次調研過程中，我們還發現溶液中肉眼看不見的浮游小顆粒對旋光度測試的穩定性有很大的影響。用了0.22um的有機過濾膜對樣品溶液過濾后，樣品檢測結果在儀器給出的測試數據的（小數點后3位）有效數內完全一致，表現出了極高的重復性。

表2 HPLC級與AR級氯仿溶劑測試比旋光度結果差異

表3 樣品溶液過濾與不過濾導致的比旋光度結果差異（相同溶劑）

圖2 樣品溶液過濾與不過濾導致的比旋光度差異（相同溶劑） 

這次問題的發生和調研讓我們更深刻地體會到，制定測試條件非但要采用高標準的試劑和化學藥品，而且對所使用的材料物品包括試劑要有詳實充分的認知并在操作規程中注明，以確保在合理的測試條件下取得具有高度重復性和準確性的最佳測試結果。

注：本文中所使用的旋光光度儀是: 美國魯道夫研究分析公司（Rudolph Research Analytical）的一款自動旋光儀 AUTOPOL I ，溫度控制20°C。